特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
2-噻吩(>98.0%(GC))2-溴-5-氟吡啶

2-甲基噻吩(>97.0%(GC))N-芐基二

甲基噻吩-2-甲(>85.0%(GC))芐

5-甲基噻吩-2-甲(>97.0%(GC))哌啶酮

5-甲基-2-噻吩甲酸(>98.0%(GC))2-溴噻唑-5-羧酸酯

甲基-2-噻吩甲酸(>98.0%(T))2,二溴噻唑

5-甲基-2-噻吩酸(含有數(shù)量不等的酸酐)N-甲基-甲氧基芐

2-基噻吩(>95.0%(GC))3,5-二甲氧

2-戊基噻吩(>98.0%(GC))氨基-1-甲基哌啶

2-噻吩甲酸(>98.0%(T))溴肼鹽酸鹽

四溴噻吩(>99.0%(GC))

2-噻吩基酸(含有數(shù)量不等的酸酐)酮基膦酸二甲酯

噻吩酸(含有數(shù)量不等的酸酐)代(鄰)二烷

1,3,5-三(2-噻吩基)(>98.0%(GC))2-氨基-硝基吡啶

2-溴三(>98.0%(GC))2-氨基-5-硝基吡啶

(N,N-二氨基)甲(>98.0%(GC)(N))1,1,1-三氟酮

4,4'-二甲基三(>98.0%(GC))N-甲基羥鹽酸鹽

(二對甲氨基)甲(>98.0%(HPLC))2,二氫-5-吲哚酮
多子小瓜蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒鋅指蛋白47抗體IL-19/NG.1/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-19抗體IgG100 ul

?BTBD14A蛋白抗體IL-20R Alpha/IL20RA/FITC  熒光素標(biāo)記白介素20受體α鏈抗體IgG20 ul

鋅指蛋白851抗體IL-20RB/IL-20R2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素20受體β鏈抗體IgG.15 mg

嗜脂蛋白2亞型A1抗體IL-20/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-20抗體IgG100 ul

酸化c-fos抗體IL-21/FITC  熒光素標(biāo)記白介素21抗體IgG100 ul

酸化c-fos抗體IL-21R/FITC  熒光素標(biāo)記白介素21受體抗體IgG20 ul

酸化原癌基因c-Jun抗體IL-22/ZCYTO18/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-22抗體IgG100 ul

酸化原癌基因c-kit抗體IL-22R/IL22RA1/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-22受體抗體IgG20 ul

1號染色體開放閱讀框148抗體IL-22BP/IL22RA2/FITC  熒光素標(biāo)記白介素22受體結(jié)合蛋白抗體IgG100 ul